Peptid sintezi nima

 

Peptid sintezi oqsil va peptid kimyosining faol sohasi bo'lib, u odatda kimyoviy usullar bilan peptid zanjirini hosil qilish uchun aminokislotalarni belgilangan tartibda ketma-ket qo'shishni o'z ichiga oladi. Asosiy sintez usullari suyuq fazali va qattiq fazali sintezdir. LPPS bilan solishtirganda, SPPS tezroq, sodda, kamroq yon reaktsiyalar va yuqori rentabellik kabi afzalliklarga ega.

 

Standart SPPS usuli, jumladan Boc (benzil) va Fmoc (tBu) strategiyalari.

 

 

Boc (benzil) strategiyasi

Ushbu sintez yondashuvida xlorometillangan, gidroksimetillangan polistirol va p-metoksibenzil (PMA) qatronlari qattiq tayanch sifatida ishlatiladi. Amino guruhi t-butoksikarbonil (Boc) bilan, aminokislotalarning yon zanjir guruhlari esa benzil hosilalari bilan himoyalangan. Boc guruhi CH2Cl2 da toza TFA yoki TFA yordamida chiqariladi va sintez oxirida yon zanjirni himoya qiluvchi guruhlar va peptid-qatron aloqalari suvsiz gidroflorik kislota (HF) yoki TFMSA kabi kuchli kislota bilan chiqariladi.

 

Fmoc (tBu) strategiyasi

Ushbu sintez yondashuvida Vang-qatroni, 2-Xlorotritilxlorid qatroni, Rink amid-AM qatroni, Rink amid-MBHA qatronlari qattiq tayanch sifatida ishlatiladi. -amino guruhi 9-fluorenilmetoksikarbonil (Fmoc) bilan himoyalangan. ), aminokislotalarning yon zanjir guruhlari esa kislotaga chidamli himoya guruhlari bilan himoyalangan. Fmoc guruhi DMF tarkibidagi 20% piperidin yordamida chiqariladi va sintez oxirida yon zanjirni himoya qiluvchi guruhlar va peptid-qatron birikmalari 1%-95% TFA bilan chiqariladi. Fmoc SPPS hozirda peptid sintezi uchun afzal qilingan usul hisoblanadi.

 

Fmoc qattiq fazali peptid sintezining asosiy tamoyillari

 

Qatronlar ni tanlang

Fmoc SPPSda eng koʻp qoʻllaniladigan qatronlar, jumladan 4-Alkoksibenzil spirti (Vang) qatroni, 2-Xlorotritil xlorid qatroni, Rink Amid qatroni, Rink Amid-MBHA qatronlari. Amid qatronlari talab qilinadigan C terminali amidatsiyasi bilan peptidlarni sintez qilish uchun ishlatiladi. Vang qatroni va 2-Cl Trt qatroni odatda C terminalsiz COOH bilan peptid sintez qilish uchun ishlatiladi. Ammo peptidning C-terminalida birinchi aminokislota sifatida Pro va Gly bo'lsa, DKP (diketopiperazin) hosil bo'lish xavfi tufayli Vang qatronidan foydalanmaslik kerak, 2-Xlorotritilxlorid qatronidan foydalanish tavsiya etiladi.

 

 

Himoyalangan aminokislotalarning qatronlarga biriktirilishi

Birinchi Fmoc aminokislota erimaydigan qo'llab-quvvatlovchi qatronga kislota labil bog'lovchi orqali biriktiriladi.

 

-amino-himoya qiluvchi guruhni himoya qilish

Peptidil-qatronning N-terminusidagi vaqtinchalik Fmoc himoya guruhi DMFdagi 20% piperidin eritmasi bilan ishlov berish orqali chiqariladi. Bu reaktsiya odatda 10-20 daqiqada tugaydi.

 

Yuvish bosqichlari

Har bir kimyoviy reaktsiyadan so'ng, qatrondan ortiqcha reagentlar, qo'shimcha mahsulotlar va reaksiyaga kirishmagan molekulalarni olib tashlash uchun yuvish bosqichlari amalga oshiriladi. Bu o'sib borayotgan peptid zanjirining tozaligini saqlashga yordam beradi.

 

Himoyalangan aminokislotalarni faollashtirish va ulash

Qatronlar bilan bog'langan himoyalangan aminokislota, navbatdagi aminokislota bilan bog'lanish uchun reaktivligini oshirish uchun faollashtiriladi. Umumiy faollashtiruvchi vositalarga HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU va HATU kiradi. Bog'lanish faollashtirilgan aminokislota va o'sib borayotgan peptid zanjirining aminokislotalari o'rtasida peptid bog'lanishini o'z ichiga oladi. Kaiser testi odatda ulanish reaktsiyalarining to'liqligini kuzatish uchun ishlatiladi.

 

Yuvish bosqichlari

Avvalgi yuvish bosqichlariga o'xshab, bu ulanish reaktsiyasidan keyin ortiqcha reagentlar va qo'shimcha mahsulotlarni olib tashlashni ta'minlaydi.

 

Qatrondan ajralish va yon zanjirni himoya qilish guruhlarini himoya qilish

Kerakli peptidlar ketma-ketligi qatronda sintez qilingandan so'ng, u tioanizol va suv kabi tozalagichlarni o'z ichiga olgan trifluoroasetik kislota (TFA) kabi parchalanish kokteyli yordamida qattiq tayanchdan ajratiladi. Bir vaqtning o'zida aminokislotalar qoldiqlarida yon zanjirni himoya qiluvchi guruhlar olib tashlanadi, bu tozalash va tahlil qilish uchun to'liq himoyalangan peptidni ko'rsatadi.